Lorsqu'un peptide de recherche est d\u00e9crit comme \u201c v\u00e9rifi\u00e9 par HPLC \u201d ou \u201c test\u00e9 par HPLC + MS \u201d, cela signifie que deux techniques d'analyse compl\u00e9mentaires sont mises \u00e0 contribution. Elles sont souvent mentionn\u00e9es conjointement, mais elles mesurent des param\u00e8tres diff\u00e9rents. Comprendre cette distinction facilite l'interpr\u00e9tation de tout certificat d'analyse.<\/p>\n
La chromatographie liquide haute performance pousse un \u00e9chantillon dissous \u00e0 travers une colonne remplie sous haute pression. Diff\u00e9rentes mol\u00e9cules se d\u00e9placent \u00e0 travers la colonne \u00e0 des vitesses diff\u00e9rentes en fonction de la force avec laquelle elles interagissent avec le mat\u00e9riau de la colonne, de sorte que le peptide principal se s\u00e9pare des impuret\u00e9s associ\u00e9es. Un d\u00e9tecteur enregistre chaque composant sous forme de pic. En int\u00e9grant la surface sous le pic principal par rapport au total, un analyste calcule un pourcentage de puret\u00e9.<\/p>\n
La HPLC est donc une puret\u00e9<\/strong> outil. Il permet de d\u00e9terminer la proportion du compos\u00e9 dominant dans l'\u00e9chantillon par rapport \u00e0 l'ensemble des autres composants \u2014 mais, \u00e0 lui seul, il ne permet pas d'identifier ce qu'est r\u00e9ellement ce compos\u00e9 dominant.<\/p>\n La spectrom\u00e9trie de masse (MS) ionise les mol\u00e9cules et mesure leur rapport masse\/charge avec une grande pr\u00e9cision. Pour un peptide, la masse mesur\u00e9e est compar\u00e9e \u00e0 la masse th\u00e9orique d\u00e9riv\u00e9e de sa s\u00e9quence d\u2019acides amin\u00e9s. Une correspondance \u00e9troite confirme identit\u00e9<\/strong>: la mol\u00e9cule correspond bien \u00e0 la s\u00e9quence indiqu\u00e9e sur l'\u00e9tiquette, et non \u00e0 un autre peptide de taille similaire.<\/p>\n La spectrom\u00e9trie de masse (MS) est un outil d'identification. Elle est particuli\u00e8rement efficace pour confirmer qu'il s'agit bien de la \u201c bonne mol\u00e9cule \u201d, mais elle ne constitue pas la principale m\u00e9thode de quantification de la puret\u00e9.<\/p>\n Examinons les lacunes que pr\u00e9sente chaque technique :<\/p>\n Utilis\u00e9es conjointement, la HPLC permet de d\u00e9terminer le \u201c degr\u00e9 de puret\u00e9 \u201d et la MS de v\u00e9rifier s\u2019il s\u2019agit bien de la \u201c bonne mol\u00e9cule \u201d. Un certificat d\u2019analyse (COA) combinant ces deux techniques offre une vision bien plus compl\u00e8te que chacune d\u2019entre elles prise isol\u00e9ment, ce qui explique pourquoi la combinaison \u201c HPLC + MS \u201d est devenue la norme pratique en mati\u00e8re de caract\u00e9risation des peptides destin\u00e9s \u00e0 la recherche.<\/p>\n Sur un rapport combin\u00e9, vous devriez voir un chromatogramme HPLC (id\u00e9alement un pic dominant propre avec un pourcentage de puret\u00e9 indiqu\u00e9) et un spectre MS ou un tableau donnant la masse observ\u00e9e \u00e0 c\u00f4t\u00e9 de la masse calcul\u00e9e. V\u00e9rifiez que la masse observ\u00e9e correspond au poids mol\u00e9culaire indiqu\u00e9 dans les sp\u00e9cifications du produit et que le chiffre de puret\u00e9 correspond \u00e0 la qualit\u00e9 que vous avez command\u00e9e.<\/p>\n Une fois que les deux techniques sont clairement s\u00e9par\u00e9es dans votre esprit, un COA peptidique de recherche cesse d\u2019\u00eatre un mur de chiffres et devient une v\u00e9rification rapide et fiable.<\/p>\n Les compos\u00e9s r\u00e9f\u00e9renc\u00e9s sont des mat\u00e9riaux de r\u00e9f\u00e9rence de qualit\u00e9 recherche destin\u00e9s \u00e0 un usage en laboratoire uniquement, et non \u00e0 la consommation humaine ou animale.<\/em><\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":" La HPLC et la spectrom\u00e9trie de masse r\u00e9pondent \u00e0 deux questions diff\u00e9rentes sur un peptide. Comprendre ce que chacun mesure rend tout COA plus facile \u00e0 lire.<\/p>","protected":false},"author":1,"featured_media":240,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[6],"tags":[],"class_list":["post-26","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-quality-testing"],"yoast_head":"\nCe que mesure la spectrom\u00e9trie de masse\u00a0: l'identit\u00e9<\/h2>\n
Pourquoi les deux sont-ils utilis\u00e9s ensemble ?<\/h2>\n
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Comparer les deux r\u00e9sultats c\u00f4te \u00e0 c\u00f4te<\/h2>\n
Conseils pratiques \u00e0 retenir<\/h2>\n
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